(微生物)需氧或兼性厌氧革兰阳性杆菌及检验

需氧或兼性厌氧革兰阳性杆菌及检验

● 考点
　　棒状杆菌属（白喉棒状杆菌）、炭疽芽胞杆菌、蜡样芽胞杆菌、产单核李斯特菌
　　生物学性状
　　临床意义
　　微生物学检查
　　【内容讲解】
　　需氧革兰阳性杆菌：

一、棒状杆菌属
G⁺，杆菌，菌体粗细、长短不一，一端或两端膨大呈棒状。
　　着色不匀，有异染颗粒。无鞭毛、无荚膜、无芽胞。
　　需氧，营养要求较高。
　　引起人类致病的主要是白喉棒状杆菌，其他大多数为条件致病菌。
　　（一）白喉棒状杆菌
1.生物学性状
　　（1）形态与染色：
　　菌体细长微弯，一端或两端膨大的革兰阳性杆菌。细菌排列呈散在L、V、Y字形及不规则栅栏状。
无荚膜、无芽胞、无鞭毛、无菌毛。
异染颗粒：Neisser（奈瑟）染色；Albert（阿培特）染色。
这是白喉棒状杆菌的形态学特征，对鉴别细菌有重要意义。
　　异染颗粒（浓染颗粒）
Neisser（奈瑟）染色：
菌体染成黄褐色，颗粒被染成紫黑色；
Albert（阿培特）染色：
菌体呈蓝绿色，异染颗粒蓝黑色。

　　（2）培养特性：
　　在普通培养基上生长不良，形态不典型。
1）血液琼脂平板：灰白色S型菌落，有狭窄的β溶血环。
2）吕氏（Loeffler）血清斜面培养基：生长迅速，形成灰白色、湿润、S型菌落。涂片染色形态典型，异染颗粒明显。
3）亚碲酸钾血琼脂：本菌能吸收亚碲酸盐，并使其还原为元素碲，使菌落呈黑色。
4）液体培养基。
　　（3）生化反应：
　　触酶试验阳性，氧化酶试验阴性。
　　分解葡萄糖、麦芽糖、果糖、半乳糖，产酸不产气。不分解乳糖，极少分解蔗糖。
　　能还原硝酸盐，不液化明胶，不产生吲哚，不分解尿素。
　　据亚碲酸钾血琼脂培养基、肉汤培养基的生长特点及生化反应，可将本菌分为轻、中、重三型。在我国以轻型多见。
　　分型与所致疾病的严重程度无关，可用于流行病学调查。
2.致病性
　　致病物质：
　　白喉棒状杆菌引起白喉，多在秋冬季节流行。以咽白喉最常见，喉白喉及鼻白喉次之，偶亦引起眼结膜、外耳道、阴道及皮肤的局部病变。
　　本菌一般不侵入血流，但其产生的大量外毒素可吸收入血，引起毒血症。毒素能与敏感的心肌、肝、肾、肾上腺等组织细胞及外周神经，尤其与支配咽肌和腭肌的神经结合，引起细胞变性、坏死、内脏出血和神经麻痹等严重损害，是白喉晚期死亡的主要原因。
　　免疫性：
　　白喉的免疫主要是抗毒素免疫，同时巨噬细胞吞噬消化能力也加强。
　　调查人群在感染或计划免疫后对白喉是否产生免疫力，可用锡克试验或致敏红细胞凝集试验。
3.微生物学检验
　　（1）标本采集：
　　无菌长棉拭子，从可疑的伪膜边缘采集分泌物，未见伪膜的疑似。
　　患者或带菌者可采集鼻咽部或扁桃体黏膜上的分泌物。
　　（2）检验方法及鉴定

　　生长情况：

　　（3）生化反应：
　　主要用于鉴别白喉棒状杆菌与类白喉棒状杆菌。
　　尿素分解试验：白喉棒状杆菌（-），类白喉棒状杆菌（+）。
　　（4）毒力试验：可作为鉴定致病菌株的重要依据。
　　体外法：Elek平板毒力测定、SPA协同凝集试验、对流免疫电泳。
　　体内法：可用豚鼠作毒素中和试验。
　　（5）临床意义：白喉杆菌的致病因素为白喉外毒素，抗原性强，毒性剧烈。K抗原（表面抗原）及索状因子亦与其致病力有关。引起的白喉是一种急性呼吸道传染病。白喉的免疫主要是抗毒素免疫。白喉棒状杆菌可引起人类白喉，白喉是一种急性呼吸道传染病，该病原菌存在于患者及带菌者的鼻咽腔中，随飞沫或污染的物品传播。白喉棒状杆菌可致气管、支气管假膜，是白喉早期死亡的主要原因，其产生的外毒素也经血液与易感组织结合，出现各种症状如心肌炎、软腭麻痹等，是白喉晚期死亡的主要原因。
　　（6）治疗原则：
　　用青霉素或红霉素等进行抗感染治疗，同时应尽早注射足量白喉抗毒素。
　　注射抗毒素前，应做皮试。
　　（二）其他棒状杆菌
　　棒状杆菌除白喉棒状杆菌外，其余统称为类白喉棒状杆菌。
　　一般无致病性或仅能与其他化脓细菌产生混合感染，有的可能为条件致病菌。
　　类白喉棒状杆菌常寄生于人类或动物鼻腔、咽喉、外耳道、眼结膜、外阴及皮肤表面等处。

二、芽胞杆菌属
　　有芽胞的革兰阳性大杆菌。大多数菌种在有氧环境下形成芽胞。有动力，非抗酸性。
　　需氧或兼性厌氧菌，在普通培养基上生长良好。
　　炭疽杆菌是人畜共患的重要致病菌，蜡样芽胞杆菌能致食物中毒。
　　（一）炭疽芽胞杆菌
　　人畜共患的急性传染病。
1.生物学特性
　　（1）形态与染色：
　　致病菌中最大的革兰阳性杆菌，两端齐平，呈竹节状。在组织内生长呈单个或短链，试管内可形成长链。
　　无鞭毛，机体内或含血清培养基上可形成荚膜。人工培养或在外界环境中易产生芽胞，形状椭圆，，其直径小于菌体。
　　（2）培养特性：
　　专性需氧。
　　普通琼脂平板：形成灰白色、不透明、无光泽、边缘不整齐、大而扁平的粗糙型菌落，在低倍镜下观察，呈卷发状。
　　血液琼脂平板：出现轻微溶血。
　　普通肉汤：管底有絮状卷绕成团的沉淀物生长，表面稍混但不形成菌膜，中层肉汤清亮。
　　碳酸氢钠琼脂平板：
有毒株-形成黏稠、有光泽的黏液型（M型）菌落，这是有荚膜的菌体构成的。
无毒株-粗糙型（R型）。
　　（3）生化反应：
　　分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气，不分解乳糖。
　　不产生靛基质及H₂S。
　　能迟缓液化明胶，沿穿刺线向四周扩散，形如倒松树状。
　　（4）抗原构造：
①菌体多糖抗原；
②荚膜多肽抗原；
③芽胞抗原；
④炭疽毒素抗原。
　　（5）本菌芽胞体抵抗力很强，在干燥土壤或皮毛中常温下可存活数十年。一般对碘及氧化剂较敏感。
2.致病性：
　　毒力因子：荚膜和炭疽毒素。炭疽毒素是致死的主要因素。
　　所致疾病：皮肤炭疽、肺炭疽、肠炭疽，病死率很高。
　　免疫性：病后可获得持久性免疫力，再感染者少见。
3.微生物检验

　　（二）蜡样芽胞杆菌
1.生物学性状　
G⁺大杆菌，呈链状排列，芽胞位于菌体中心或次末端不突出菌体。
　　引起食物中毒的菌株多为周毛菌，不形成荚膜。
　　营养要求不高，菌落较大，表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状。
2.临床意义
　　大量的蜡样杆菌污染（10⁶～10⁸/g）可致食物中毒，有腹泻型与呕吐型之分。
3.微生物检验　
　　除作分离培养外，细菌计数对本菌所致食物中毒有诊断价值。

三、产单核李斯特菌
　　（一）生物学特性
1.形态染色：
　　菌体短小大小，常呈V字形或成对排列，偶呈丝状。
　　有鞭毛、无芽胞，20℃有动力，37℃动力缓慢，一般不形成荚膜。
　　幼龄菌呈革兰阳性，陈旧培养物多转为革兰阴性。
2.培养特性：
　　需氧或兼性厌氧，营养要求不高。
　　血琼脂平板：形成小而透明的S型菌落，有狭窄的β溶血环。
因其能生长于4℃，故可进行冷增菌。
　　半固体培养基：出现倒伞形生长。
3.生化反应　
　　不发酵甘露醇和木糖，硝酸盐还原阴性，CAMP阳性。
　　可发酵多种糖类，触酶阳性，不形成吲哚，不分解尿素，能水解七叶苷。
4.根据菌体及鞭毛抗原的不同，可分4个血清型。
5.本菌耐碱不耐酸。对热较为敏感，加热50℃ 10分钟可死亡。
　　（二）致病性
　　致病物质主要是溶血素和菌体表面成分。
　　由带菌动物或人粪便污染动物制品，而经口感染。通过胎盘或产道感染新生儿是本病的重要特点。宫内感染常可导致流产、死胎及新生儿败血症，死亡率较高。
　　本菌常伴随EB病毒引起传染性单核细胞增多症，此外可引起脑膜炎。
　　机体主要靠细胞免疫功能清除本菌。
　　（三）微生物检验
1.标本采集　根据感染部位不同而采取相应标本。
2.检验方法与鉴定
　　（1）分离培养：将标本接种两支脑心浸液培养基中。分别置37℃和4℃培养。转种血平板上。从血平板上挑取β溶血环的菌落，做涂片染色镜检并进一步鉴定。
　　（2）鉴定：
　　在血琼脂上有狭窄的β溶血环，25℃动力最强，在半固体培养基上呈伞状生长，可在4℃冷增菌生长，木糖、甘露醇和H₂S阴性。CAMP（与金黄色葡萄球菌协同溶血）阳性。触酶阳性。

四、丹毒丝菌属
　　红斑丹毒丝菌为革兰阳性杆菌，单个存在或形成短链。
　　无芽胞、无鞭毛、无荚膜。
　　厌氧或微需氧菌，初次分离要在厌氧环境中培养。
　　血琼脂平板形成两种菌落：光滑型菌落-细小、圆形、突起有光泽；粗糙型菌落-大，表面呈颗粒状。
　　触酶试验阴性。48小时发酵葡萄糖、乳糖，产酸不产气。
　　对湿热及化学消毒剂敏感。
　　红斑丹毒丝菌引起红丹毒丝病，感染局部的皮肤发红、肿胀、疼痛、或有痒感。也可引起急性败血症或心内膜炎。
　　本菌对青霉素、头孢菌素、红霉素和四环素等药敏感。

五、阴道加特纳菌
　　引起非淋菌性阴道炎的主要病原菌之一。
　　新鲜标本分离菌株趋向革兰染色阳性，保存菌株趋向革兰染色阴性。本菌无芽胞、无荚膜、无鞭毛，多形性。
　　营养要求较高，在5%人血平板上，在3%～5%C0₂、可形成针尖大小菌落，在人血和兔血平板上可出现β溶血环。
　　对氨苄西林、羧苄西林、苯唑西林、青霉素、万古霉素和甲硝唑敏感。对萘啶酸、新霉素、粘菌素和磺胺嘧啶耐药。　　

　　本章小结：
　　一、白喉棒状杆菌
　　二、炭疽芽胞杆菌
　　三、产单核李斯特菌、红斑丹毒丝菌、阴道加特纳菌

                           检验之韵欢迎您