【检测课堂】常见细菌分离鉴定方法(二)

以无菌操作的方法直接用接种环醮取病变组织接种到亚硫酸铋琼脂、HE琼脂、SS琼脂、麦康凯琼脂培养基上，37℃恒温培养18-24 h，观察细菌生长情况及菌落特征。

挑选亚硫酸铋琼脂 （BS）、SS琼脂、麦康凯琼脂或HE琼脂上可疑的单菌落抹片，进行革兰氏染色、显微镜观察。沙门氏菌是革兰氏阴性细长杆菌，中等大小（0.5μm×1-2.5μm)，两端钝圆，无芽孢和荚膜，有鞭毛，能运动，单个散在（见图示1）。

鸡白痢、鸡伤寒菌型沙门氏菌生长贫瘠，菌落较小，直径约0.5mm。其他沙门氏菌生长良好，形成中等大小、圆形、边缘整齐、湿润、稍隆起、无色、半透明的菌落，直径约1.5mm。

菌落特点与普通琼脂平板上相同，灰白色，不溶血。

肉汤轻度混浊，管底有絮状沉淀，无菌膜及菌环。

菌落呈黑色有金属光泽、棕褐色或灰色，菌落周围培养基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰绿色的菌落，周围培养基不变（见图示2）。

菌落灰褐色或灰绿色，多数菌落中心黑色或几乎全黑色；有些菌株（亚利桑那乳糖阳性菌株）为黄色，中心黑色或几乎全黑色（见示3）。

菌落无色半透明，表面光滑湿润，产硫化氢的菌株菌落中心带黑色（见图示4）。

圆形、微凸、边缘整齐、直径在1～2 mm的小菌落，菌落无色透明、淡黄色透明。

表面光滑、圆形、微凸、边缘整齐、粉红色、直径在l-2 mm的小菌落。

以无菌操作的方法直接用接种环醮取病变组织接种于血琼脂培养基上，37℃恒温培养18-24 h，观察细菌生长情况及菌落特征。

挑取血琼脂上无色透明、圆形光滑、湿润的露滴状小菌落，涂片染色镜检。革兰阳性，圆形的球状细菌，菌体直径0.1-0.8μm，有很厚的荚膜，不运动，不形成芽孢，常以双球或6-8个菌体排列成链状存在。

兼性厌氧菌，在普通琼脂上生长缓慢而不良，在加有血液、血清的培养基上生长良好。

在鲜血琼脂平板上呈灰白色、半透明、细小如露珠状、表面光滑、湿润、粘稠、边缘整齐的隆起的圆形菌落，直径在1-2mm。C群兽疫链球菌可产生β-溶血，D群链球菌呈α-溶血或不溶血（见图5）。

生长良好，先呈均匀一致的轻度混浊，继而变清，于管底形成粘性沉淀，液面不形成菌膜（见图6）。

培养24小时后，形成针尖大小无色的小菌落；如继续培养，则菌落会增大并呈浅蓝白色。

以无菌操作的方法直接用接种环醮取病变组织接种于改良Camp-BAP 琼脂或 Skirrow 琼脂培养基上，37℃恒温厌氧培养24-48 h，观察细菌生长情况及菌落特征。（厌氧培养：如有厌氧培养箱的，接种后尽快放入进行培养；也可用烛缸法，直接将接种后的培养基放入玻璃干燥器中，待蜡烛熄灭后放入恒温培养箱培养。

本菌为革兰阴性菌，呈 S 形、螺旋型或纺锤形，在固体培养基上培养时间过久或条件不适宜的情况下常呈现球形菌，大小为(0. 3- 0. 4) pm X (1. 5- 3) pm，（见图7）。

生长温度最适为42℃，在5%氧气、10% 二氧化碳和 85% 氮气的混合气体中长势最好。一般条件下实验室需厌氧培养。

不溶血，灰色、扁平、湿润、有光泽，看上去呈水滴样，边缘整齐（见图8）。

本周检测课堂为大家分享了沙门氏菌、链球菌、弯曲杆菌三种常见菌的分离培养鉴定方法，下周四《检测课堂》为大家带来“葡萄球菌、链球菌、弧菌”的分离培养鉴定，敬请期待！